酵母蛋白抽提試劑盒的注意事項(xiàng)有哪些?
更新時(shí)間:2015-08-18瀏覽:2155次
1、*次使用
酵母蛋白抽提試劑盒前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說明在漂洗液中加入無水乙醇配制成工作液
。
2
、溶液YP1在使用前先加入RNaseA
,將試劑盒中提供的RNaseA 全部加入
,混勻,置于2-8℃保存
。
3
、質(zhì)粒得率與酵母菌株、質(zhì)?div id="jpandex" class="focus-wrap mb20 cf">?截悢?shù)
、培養(yǎng)條件等因素有關(guān)。通常酵母質(zhì)?div id="m50uktp" class="box-center"> ?截悢?shù)都很低,
酵母蛋白抽提試劑盒一般通過電泳或分光光度計(jì)法都很難檢測(cè)到
,可通過PCR 或轉(zhuǎn)化大腸桿菌來檢測(cè)
。
4、使用前請(qǐng)先檢查溶液YP2和溶液YP3是否出現(xiàn)混濁
,如有混濁現(xiàn)象
,可在37℃水浴中加熱幾分鐘,待溶液恢復(fù)澄清后再使用
。
5
、得到的基因組DNA片段的大小與樣品保存時(shí)間、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)
?div id="m50uktp" class="box-center"> ;厥盏玫降腄NA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液
,而使用去離子水
,比值會(huì)偏低,因?yàn)閜H值和離子存在會(huì)影響光吸收值
,但并不表示純度低
。
6、洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于50ul
,體積過小影響回收效率
;洗脫液的 pH值對(duì)洗脫效率也有影響,若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其pH 值在8.0左右
,可用NaOH 將水的pH 值調(diào)至此范圍
,pH 值低于7.0會(huì)降低洗脫效率;
酵母蛋白抽提試劑盒在DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃
,以防 DNA降解
。這種方法針對(duì)雙向電泳
,雜質(zhì)少,離子濃度小的特點(diǎn)
!當(dāng)然單向電泳也同樣適用
,只是電泳的條帶會(huì)減少。